1. 시술전 검사의 의미와 필요성 및 진행과정에 대하여 의사가 환자에게 설명하고, 금욕기간을 확인한다.
2. 검사실에서 가까운 장소에 보안 및 비밀유지가 되는 안정된 별실 공간을 확보하여 환자에게 제공한다.
3. 3~4일 정도 금욕을 한 피험자의 정액을 광구용기에 채취한다.
4. 32~34℃ 항온판(slide warmer) 위에서 15분~30분 동안 정액 액화를 시행한다.
5. 정액검사정액량(Volume), 정자농도(concentration), 운동성(motility), 직진운동성(progressivemotility), 활동성(sperm activity) 등을 측정하며 그 외 점도(viscosity), 응집도(agglutination), 잔해물(debris), 백혈구(WBC), 적혈구(RBC)가 관찰되는 경우 추가 기재한다.
6. 정액 세척 (Semen washing) 정자 농도가 낮을 경우, 15ml 원심관 튜브(conical tube)에 정액을 넣고 PBS로 세척하여정액 내 잔해물을 제거하고 300g 속도로 5분 동안 원심 분리하여 상층 액은 제거하고pellet만 사용한다.
7. 정자 염색Slide glass에 환자 정보를 기재하고 10ul의 정액을 smearing하여 항온판에서 dry 한다. Diff-Quik fixative solution을 이용하여 30초 동안 fixation 후 dry 하고 Diff-Quik solutionⅠ에서 20초 동안 1차 염색 후 D.W로 washing 한 후 dry 한다. 마지막으로 Diff-Quiksolution Ⅱ 에서 10초 동안 2차 염색 후 D.W로 washing 한 후 dry 한다.
8. 정자 정밀 형태 검사정자 염색이 끝난 slide에 immersion oil을 한 방울 떨어뜨리고 1000배율의 위상차 현미경 하에서 kruger strict criteria를 바탕으로 관찰 후 장부에 결과를 기재한다.
9. 세부 검사 항목WHO manual에 근거하여 normal morphology, head structural defects (includeamorphous, elongate, pyriform, macro, micro, tapering, vacuole head), mid-piecedefects(include excess residual cytoplasm, broken neck), tail defects(include coiled, short, hairpin tail)로 구분하여 1000ea 이상의 정자 형태 검사를 실시하며, 항목 외의 비정상적 형태의 정자가 일정 비율 이상 관찰될 경우 추가 기재한다.
