1. 정액 처리 개시 전 준비
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1. 정액 처리실 환경관리매일 정액 처리실의 각종 기자재 소독 및 청결 정도를 확인하여 환경관리 체크리스트를작성하며, 배양기(incubator)의 온도와 이산화탄소(CO2) 농도를 매일 아침 측정, 관찰 후incubator check list 장부에 작성하여 정액처리에 적합한 환경임을 확인한다.
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2. 고환조직 처리 medium 준비사용 전 Ham's F-10 medium에 penicillin-streptomycin 1%를 첨가하여 분주하고, 37℃, 5% 이산화탄소 농도의 배양기(incubator)에서 충분히 예열 후 사용 직전 예열된 serum을 20% 농도로 첨가하여 사용 준비를 완료한다.
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3. 고환조직 처리 개시는 동결용기(Vial)에 부착된 환자와 원내 OCS의 환자정보, 동결정보, 처방정보가 정확함을 확인 후에 시행되며 처리자 외 연구원 1인 이상의 확인 후 시행을 원칙으로 한다.
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4. 고환조직 해동에 사용 될 항온수조(water bath)는 멸균증류수를 채우고 37℃로 준비한다.
시술 중
1. 고환조직 해동고환조직 해동은 시행 전날 해동하여 배양 후 사용하는 것을 원칙으로 한다. 환자정보를미리 숙지하여 난자채취 실패 가능성이 예상되는 경우 당일 해동할 수 있다. 고환조직해동은 환자정보, 동결 정보를 확인한 후 동결 용기(vial)를 액화질소 저장 탱크에서 꺼내37℃ 항온수조(water bath)에 담궈 5분 동안 흔들어 해동하며 이 과정에서 처리자 외 연구원 1인 이상의 확인 후 시행 원칙으로 한다.
2. 해동 고환조직 처리해동 뒤 용기에 있는 조직을 배양액이 담긴 배양접시로 옮겨서 조직의 정세관에서 정자를 짜낸다. 환자정보가 입력된 15ml의 원심관 튜브(conical tube)에 짜낸 정자를 넣는다. 300g에 4분 동안 원심분리 한다. 배양접시 준비한 배양액을 넣고, 환자 정보를 정확히기입하여 둔다. 원심분리 후 상층액을 제거하고 준비한 배양액으로 pellet을 풀어준 뒤환자 정보가 기입된 배양접시에 나누어 넣고, 균등하게 골고루 퍼지게 한다. 처리가 끝난고환조직이 담긴 배양접시는 배양기에 넣는다.
3. 해동 고환조직 확인배양기에서 배양 후 30분이 지난 후 꺼내어 현미경으로 정자유무 및 상태를 관찰하여 기록한다. 배양기에 다시 넣은 후 다음날 아침에 다시 정자유무 및 상태를 관찰하여 결과를 기록한다. 난자가 채취가 확인되면 배양접시에 있는 샘플을 15ml tube에 모아서 300g에 4분 동안원심분리 한다. 상층액을 제거하여 pellet 상태로 ICSI 시까지 지정된 곳에 보관한다.
시술 후
1. 결과 입력디지털 기록(Digital recording)은 원내 OCS(EMR) system에 입력하며 문서 기록(paperrecording)은 생식보조시술 장부 기재 후 처리자 외 연구원 1인 이상의 검수를 원칙으로하며, 10년 보관 한다.
2. 지속적인 질향상을 위해 검사결과를 주기적으로 통계 분석한다.